RNA的提取具体步骤
RNA提取原理用Trizol 的溶液提取，将总RNA与 DNA 和蛋白质分离。Trizol 是一种酸性溶液，含有硫氰酸胍 (GITC)、苯酚和氯仿。GITC 不可逆地使蛋白质和 RNase 变性。随后进行离心。在酸性条件下，总 RNA 保留在上层水相中，而大部分 DNA 和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。然后通过用异丙醇沉淀回收总 RNA。RNase 酶可以通过加入吡咯碳酸二乙酯 (DEPC) 来灭活。
RNA的提取具体步骤：
1、从液氮中取出组织后，快速的拿到超净台上，放入小皿中，加入trizol试剂，（100mg的组织放入1.2ml的trizol试剂），用注射器进行研磨，注意要熟练，快速研磨。（下面加的试剂按照1ml trizol的比例添加即可）。
2、细胞或组织加入Trizol研磨后，15~30℃孵育15min，使其充分裂解。(此时如果不接着做下面的实验可以冻存于-80℃低温冰箱)。
3、4℃，12000转，离心5min ,弃沉淀。（超净台准备好EP管，离心后，吸取上清至准备好的EP管中）按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，剧烈振荡15s,（用手震荡即可）15~30℃孵育2~3min。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。（氯仿又叫三氯甲烷chloroform，一般储存在4℃冰箱中）。
4、4℃，12000转,离心15min。吸取上层水相，至另一离心管中。注：（1）吸取水相要小心，千万不要吸取中间界面。可采用小枪头少量多次吸取（2）若同时提取DNA和蛋白质，则保存下层有机相，存于4℃冰箱内备用，否则弃下层有机相。
5、按500ul异丙醇/ml Trizol 的比例加入异丙醇，用手震荡一下，15~30℃（室温即可）孵育10min。2~8℃，12000g,离心10min,弃上清，RNA沉于管底。按1ml 75％乙醇／ml Trizol加入75％乙醇，漩涡混匀，悬浮沉淀。（注：75％乙醇用DEPC水配制）
6、4℃，7500转离心5min，尽量弃尽上清（注：用完离心机关电源后，将离心机盖打开30分钟降温，再盖上）室温晾干或真空干燥5~10min。（注：不能用离心的方法使RNA干燥，RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。）
7、1×RNAsafe30 ul（或1‰DEPC水30ul）溶解RNA沉淀,60℃水浴20min（注：用蒸馏水配置1/100的DEPC水高压后才能用,20×RNAsafe 用DEPC水稀释）测OD值定量RNA浓度（用DU800紫外光度计测量）如果提取的RNA不进行逆转录可在-80℃保存。
