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猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit

猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit




猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit

  • 商品货号:BJ002307
    商品库存: 100
  • 商品品牌:邦景/BHBT
  • 上架时间:2014-09-10
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商品描述:

商品属性

本试剂盒仅供研究使用。
猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)。用纯化的猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL),再与 HRP 标记的猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗体结合,形成抗体抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)浓度。

猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit安全性:
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
试剂盒的组成:

猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit样品收集、处理及保存方法:
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,10×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能
不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E(1:50~200,终浓度 5~20 nM),37
℃湿盒中孵育 30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit操作注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒Pig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月

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