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胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒微量法测定步骤

 测定原理:

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。

测定步骤:

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到580 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min

3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL标准品,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580 nm测光吸收,记为A标准管。

4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL蒸馏水,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于 580 nm测光吸收,记为A标准空白管。

5. 对照管: EP管,加入100 μL蒸馏水,置于37℃水浴保温10min;加入100μL试剂四,盖紧后摇匀1min;加入20μL粗酶液,混匀后8000g 4℃离心10分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL,再加入40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580 nm测光吸收,记为A空白管。

6. 测定管: EP管,加入20μL粗酶液,100μL试剂三,置于37℃水浴保温10min;加入100μL试剂四,盖紧后摇匀1min8000g 4℃离心10分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL,再加入40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于 580 nm测光吸收,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。

测定意义:                           

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。

 

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