探究PCR引物的必要性
PCR引物的必要性：
1、 pcr技术的基本原理类似于dna的自然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
2、pcr是一种体外dna扩增技术，它依赖于dna聚合酶在模板dna、引物和四种脱氧核苷酸存在下的酶促反应。待扩增的DNA片段及其两侧互补的寡核苷酸链引物通过“高温变性-低温退火-引物延伸”三步反复循环，使DNA片段的数量成倍增加，因此在短时间内，我们需要大量的特异性基因片段。
3、dna聚合酶无法从头合成与模板链匹配的新链，只能在模板链上以一段短小（一般几bp至十几bp不等）但与模板链配对紧密的链作为起始链，沿5->3方向合成新链，这个过程我们称之为“延伸”。
4、起始链的合成在真核细胞体内是由rna聚合酶（对就是转录时用的那个）代劳的，此酶具有从头合成链的能力（即“起始”能力）之后dna合酶以这段短的rna链为起始，不断延伸合成新链。这段短rna链起到了“引发”新链合成的功能，因此也被称作“引物”。在原核生物中，dna分子以环状形式存在，随便切个口就可以以切口3端作为起始开始延伸了 （当然人家细菌还是有操守的，为了切得方便还是门设置了一个复制起始位点）。
5、在dna新链延伸完毕后，真核细胞需要将作为起始链的rna链替换为dna，这个过程依据位置不同在细胞里大致有两种处理方式：如果引物在dna链一端，别说了直接上端粒合酶吧；若引物位于dna链中间，则是由同样具有dna延伸活性（但速度比述的dna合酶慢许多）并兼具5->3方向水解能力（这样才能把引物rna链切掉）的另一种dna合酶代劳，后用dna连接酶将替换链和新链之间的小缺口填补上。原核生物等低等生物中由于有滚环复制θ复制等特殊机制存在，复制流程的细节上会有差异，并且会多一步切割并环化dna分子的步骤，不过总体机制大同小异。
可见，在生物体内的dna复制过程是复杂的，需要多种酶先后参与进来，并且对于dna的延伸来说，引物是必不可少的。
6、在体外的pcr体系中，由于：
①出于成本考量，暂时没有发现并优化在pcr工作温度（55°C－－95°C+）下仍具有很好活性的rna合酶、dna合酶（替换引物用）、dna链接酶。
②出于现有工艺考量，从头合成设计好的dna短引物是相对简单快捷的技术，并且可以省略引物的替换步骤。
因此使用短dna作为引物是必要且高效的选择。
