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1、组织脱水，透明 ：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
2 、切片时展片： 有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
3、烤片： 60℃ 30分钟或37℃过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
4、蜡块及切片的保存： 最好在4℃保存。
5、脱片问题 ： Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化 染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。

6、抗体稀释： 应遵循“现用现配”的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。

7、背景高： 在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特别是在显色之前要多洗。
8、返蓝： 在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如PBS）或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。
9、显色： 一定要在显微镜下观察，注意控制背景。

10、在整个操作过程中，切片千万不能干燥，否则会有非特异性染色。