摇瓶培养和发酵罐培养步骤
本实验通过摇瓶培养和发酵罐培养分别小量和大量诱导菌种表达，获得了目的蛋白的粗提物，通过Amylose亲和层析获得纯化蛋白。
实验步骤：
1、 摇瓶培养
1)、取出4℃下平板保藏的菌种，挑取单菌落，接种于5ml LB培养基(含有Amp100ug/ml)的试管中，37℃,300r/min,恒温振荡培养,过夜活化;
2)、 然后按5%的接种量将活化菌种接入到含100m1 2-YT培养基(含有Amp 100ug/ml)的500mI摇瓶中，37℃, 300 r/min,恒温振荡培养，作为2L摇瓶培养的菌种。
3)、 然后按5%的接种量将活化菌种接入到含400m1 2-YT培养基(含有Amp 100ug/ml)的2L的摇瓶中，37℃, 300 r/min,恒温振荡培养。
起始诱导时机为菌体OD600=4，诱导剂IPTG (IPTG贮液:浓度为20%, 0.22um膜过滤除菌，分装后-20℃冻存。)浓度为0.03 mmol/L，诱导表达的时间控制在4h左右。
2、5L发酵罐培养
1)、 取出4℃下平板保藏的菌种，挑取单菌落，接种于5ml LB培养基(含有Amp100ug/ml)的试管中，37℃, 300 r/min,恒温振荡培养。过夜活化;
2)、 然后按5%的接种量将活化菌种接入到含100ml 2-YT培养基(含有Amp 100ug/ml)的500mI摇瓶中，37℃, 300r/min,恒温振荡培养，作为5L发酵罐的菌种。
在基因工程菌株5L高密度发酵过程中，温度由系统自动控制在37℃，通过自动流加5N氢氧化钠和2N的盐酸使pH保持在7左右，葡萄糖的流加采用恒速流加，即培养5h后开时流加补料，以0.042g. (L. min)-1葡萄糖的的速率进行补料。发酵的IPTG诱导时机均为OD600约为3时进行诱导，IPTG的浓度为0.1 mg/ml。
