实时荧光PCR技术进行核酸检测过程
核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸，来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”，即可证明患者体内有病毒存在。核酸检测，从基因水平检测病毒，具有高度的敏感度和特异度，且克服了病毒分离鉴定耗时长。核酸检测的物质是病毒的核酸。抗原检测窗口期的缺点，2019-nCoV属RNA病毒，需要先逆转录为cDNA，再进行扩增检测，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值得大小，可以判断患者样本中是否含有SARS-CoV-2。
RT-PCR技术原理：
Real-time quantitative PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定的阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。
荧光阈值：PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号标准偏差的10倍；
Ct值：C代表Cycle，t为threshold，Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。
检测流程：
检测主要经过取样、留样、保存、核酸提取、上机检测等五个步骤：
① 取样：用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5~10次，且不断旋转拭子；
② 留样：将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖子，进行留样；
③ 保存：将样品2~8℃保存，并及时送检；
④ 核酸提取：将灭活病毒后的样本进行核酸提取；用于后续检测；
⑤ RT-PCR核酸检测：将提取物进行RT-PCR扩增反应，反应时间约为70~80min。
优势：
① 缩短了检测时间，提高了检测效率，降低检测过程中可能出现的污染和假阳性；
② 可通过绘制融解曲线、使用特异性探针等方式降低非特异性扩增，所以相比于常规 RT-PCR，其具有操作简便快捷，特异度强，灵敏度高等优点。
