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淀粉含量试剂盒都是如此好用

    测定原理: 利用 80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖, 采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。

    测定意义: 淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢 都有重要意义。

    需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、浓 硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

    试剂的组成和配制:

    试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

    试剂二:液体 105mL×1 瓶,4℃保存;

    试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;

    淀粉提取:

    1、 称取 0.1~0.2g 样本(建议称取约 0.1g 样本)于研钵中研碎,加入 1mL 试剂一,充分匀 浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀。

    2、 沉淀中加入 0.5mL 蒸馏水,放入 95℃水浴中糊化 15min(盖紧,以防止水分散失)。

    3、 冷却后,加入 0.35mL 试剂二,25℃常温提取 15min,振荡 3-5 次。

    4、 加入 0.85mL 蒸馏水,混匀,3000g,25℃离心 10min,取上清液待测。

    测定步骤:

    1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。

    2、 调节水浴锅至 95 度。

    3、工作液的配制:临用前在试剂三中加入 3.75mL 蒸馏水后,缓慢加入 21.25mL 浓硫酸, 不断搅拌,充分溶解,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;

    4、样本测定:取50μL样本和250μL工作液至EP管中,95度水浴10 min(盖紧,防止水分散 失),自然冷却至室温,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,在620 nm 波长下记录测 定吸光度值A。

    淀粉含量计算:

    a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 5.872x - 0.0295;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

    1、按照蛋白浓度计算 淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr 2、按样本鲜重计算 淀粉含量(mg/g 鲜重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1.7 mL;Cpr:样本蛋白质 浓度,mg/mL;W:样本质量,g

    b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 2.936x - 0.0295;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

    1、按照蛋白浓度计算 淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr 2、按样本鲜重计算 淀粉含量(mg/g 鲜重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1.7 mL;Cpr:样本蛋白质 浓度,mg/mL;W:样本质量,g

    注意:由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。  若吸光值大于1,请将样本用提取液稀释后再测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数。 提取液的配置:0.35mL 试剂二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。

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