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多克隆抗体制备抗原都有哪些要求
抗体很多人身体里都有,多克隆抗体也是抗体中的一种。而用多克隆抗体制备抗原也不是一件容易的事情,有很多事情都要注意,不然是很容易失败的。下面就来介绍一下多克隆抗体制备抗原都有哪些要求?
1 可溶性蛋白,浓度最好在1–5mg/ml之间,最小不得低于0.5mg/ml。
2 切胶研磨的蛋白,有必要磨细,能顺利经过9#针头(或一次性5ml打针器的针头),经考马斯亮蓝染色的胶,需脱色,并将冰醋酸洗掉。含免疫蛋白(3mg以上)的胶的体积尽量控制在3ml以内。
3 不管打针何种状况蛋白,均不该含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。
4 免疫一只兔子需求3mg蛋白,免疫一只小鼠需求300ug蛋白,免疫一只豚鼠需求1.6mg蛋白,免疫一只大鼠需求1.6mg蛋白。
5 蛋白的纯度大于85%。
6 分子量小于20KD的蛋白免疫作用可能不抱负。
7 变性蛋白免疫产生的抗体跟天然蛋白有可能不发生抗原抗体反响。
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