ELISA试剂盒加样不准确？这几个技巧帮你解决
当拿到ELISA试剂盒，在开始做实验之前，正确的加样可以确保实验结果准确性。在ELISA常规实验中，实验涉及加样标准品/样本、加酶结合物、加底物和终止反应等。在进行ELISA试剂盒加样怎样确保实验准确性？以下是关于标准化加样流程及注意事项相关内容：
一、加样前准备
1、试剂平衡：将试剂盒及待测样本恢复至室温（20-25℃），避免温度差异影响反应效果。
2、标准品稀释：
取7个离心管，标记为S2-S7及空白对照（Blank）。
每管加入200μL标准品稀释液，从S1标准品中吸取200μL加入S2管，依次等比稀释至S7管（第8管为空白对照）。
酶标板准备：在酶标板孔中加入稀释后的标准品及待测样本，每孔建议加样量≥50μL（复孔需≥100μL）。
二、加样操作要点
1、加样角度：吸头应倾斜45°贴近孔壁与液面交界处加入，避免垂直滴加导致液体残留。
2、加样顺序：
先加标准品，后加样本，确保反应时间一致。
显色液和终止液的加入顺序需固定，避免显色时间差异。
加样速度：需缓慢均匀，保证微量加样的准确性和均一性。
三、孵育与洗涤
1、孵育条件：加样后封板膜密封，37℃恒温孵育（通常50-90分钟，具体时间根据试剂盒说明调整）。
2、洗涤步骤：
甩干孔内液体，每孔加入300μL洗涤液，浸泡30秒后倒出，重复洗涤3-4次。
拍干板内水分，避免残留液体干扰后续反应。
四、关键注意事项
1、加样间隔控制：加酶和显色剂的间隔时间需≤15分钟，过长可能导致质控结果失控。
2、加样量准确性：加样量不足（如≤8μL）可能影响S/CO值，需使用校准后的移液器并规范操作。
3、质控方法优化：推荐采用随机孔位加质控物，减少固定孔位（如A1、H12孔）的系统误差。
五、常见问题解决
加样误差：若移液枪漏气导致加样量不足，需记录并重新加样，不可用枪头反复吸取。
孔位区分：加样后可用报纸垫底，通过液面反光或文字变形快速识别已加样孔。
通过规范操作和细节控制，可显著提升ELISA检测的重复性和准确性。
