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ELISA实验检测样品血清介绍

   酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯yi烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。它是应用最多的一种免疫酶技术。ELISA试剂盒(ELISAKits)已成为药物和植物病理学研究中的常用诊断工具,是检测组织提取液、血清和细胞培养液中目标抗体/抗原的理想工具,也是重要的质量控制手段。
  通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步,下面介绍一下血清样本的处理方法。血清是最常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
  采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

ELISA 实验中血清的采集、处理和保存:
1、真空采血针采集 2ml 新鲜血液,加入无菌试管中;
2、采血后室温静置 1 小时;
3、将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。
4、取上清。 分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存 24-48 小时;
-20℃下,可放置保存 1 个月;
-70℃下,可放置保存 6 个月;
5、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。
大部分 ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以 HRP 为标记的 ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性 HRP,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,间接法 ELISA 中可使本底加深。

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